Las infecciones por el virus del herpes simple (VHS) son muy prevalentes a nivel mundial. Su diagnóstico es predominantemente clínico, pero cada vez se fomenta más su confirmación mediante pruebas de laboratorio. Se realizó un estudio observacional retrospectivo de las infecciones mucocutáneas por VHS confirmadas mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) durante 6 años, en el mayor hospital universitario terciario portugués. Durante el periodo de estudio, se realizaron 947 pruebas mucocutáneas para detección de herpesvirus por PCR, de las cuales 448 fueron positivas, 266 para VHS. Considerando las infecciones mucocutáneas por VHS confirmadas por PCR, el VHS-1 fue la causa principal de herpes oral y el VHS-2 de herpes genital. Un tercio de los pacientes estaban inmunodeprimidos, lo que demuestra el riesgo de infección por herpesvirus y de su reactivación en este contexto. El herpes genital debido al VHS-1 fue más frecuente en las mujeres, en los pacientes más jóvenes y presentó una menor proporción de infección recurrente. Este estudio demuestra el espectro clínico variable de las infecciones por VHS y la importancia de su confirmación mediante pruebas de laboratorio, ya que el reconocimiento del patógeno específico puede determinar el pronóstico y el tratamiento más adecuado.